荷兰Radboud大学Schuurbiers等报告的研究显示，血液肿瘤突变负荷(bTMB)或可用于筛选免疫疗法患者的生物标志物，高bTMB值与肿瘤突变负荷(tTMB)强相关，低bTMB可能是疾病早期较低肿瘤负荷或脱落较少所致，对于较晚期肿瘤，bTMB预测敏感性媲美tTMB，即使少于600 kb也有较高的预测效能，提示bTMB可作为筛选免疫疗法患者的可用标志物。(J Immunother Cancer. 2022, 10: e004064. DOI: 10.1136/jitc-2021-004064)

肿瘤突变负荷已被作为筛选免疫治疗优势人群的生物标志物，高TMB肿瘤产生更多新抗原，引发更强的抗肿瘤免疫反应。FoundationOne CDx(F1CDx)已获FDA批准用于帕博利珠单抗治疗人群的筛选。bTMB或可弥补肿瘤突变负荷检测的有创和样本量及并发症等不足，成为较好的TMB检测标志物。但测序深度使得bTMB费用较高且容易得到假阴性结果。研究者设计了小型bTMB检测谱，探讨其检测效能及与tTMB的相关性等。

研究者使用LEMA试验(NCT02894853)中收集的全血标本，185例未接受治疗的Ⅰ~Ⅳ期NSCLC患者标本用设计的TMB检测panel进行了检测。结果显示，1.1Mb的TMB panel显示较高的TMB检测准确性，tTMB界值为16 mut/Mb和bTMB界值为42 mut/Mb时阳性预测值95%，bTMB的阳性符合率(PPA)相对较低，为32%。在Ⅳ期标本中，cfDNA至少20 ng，bTMB的PPA提高到63%，panel减小到577 kb仍能达到63%的PPA。

研究者利用已有2.2 Mb的tTMB检测panel对183例肿瘤组织样本进行了分析，结果显示tTMB检测panel的TMB中位值高于TCGA数据库中肺癌、腺癌和鳞癌样本的全外显子测序分析值(13.9 vs. 7.6)。研究者利用CAPP-Seq panel设计算法，致力于设计一款较小的且突变量最大化的用于肺TMB检测的血浆panel，使每个样本的检测成本最小化。以覆盖关键基因的约300 kb为核心，每次添加50 kb最终得到一个约1.1Mb的肺TMB检测panel，覆盖965个基因的外显子区域。

研究者用这个bTMB panel对178份血浆样本进行了分析，结果发现测序深度与cfDNA量密切相关，当cfDNA量大于30 ng时测序深度大于3000，提示该panel检测突变准确度较高。

为了评估这一bTMB panel的临床效能，研究者利用一个NSCLC患者队列WES数据进行了in-silico模拟分析，结果显示WES界值(10 mut/Mb)转换后相当于该panel的19.3 mut/Mb。

在有持久临床获益和无持久临床获益患者中，与WES相比，bTMB panel对两类患者的区分效能更强，在对无进展生存的改善预测效果也更强。

为比较tTMB与bTMB，研究者用bTMB重新捕获组织样本，确定两个panel的TMB值相关方程，tTMB panel中16 mut/Mb相对应于bTMB的42 mut/Mb。用tTMB界值16 mut/Mb进一步评估血浆与肿瘤组织间TMB分类的一致性，发现bTMB panel检测TMB-H的PPV较高(91%~100%)，提示血浆检测准确性较好，但bTMB panel检测TMB-H的PPA较低(24%~32%)，提示敏感度较低。研究者认为可能与早期或脱落率较低肿瘤所提取的cfDNA量少所致，cfDNA量增加，组织和血浆TMB的相关性增加，研究者建议cfDNA量要在20 ng以上，才能准确可重复地评估bTMB。

研究者分析了肿瘤负荷对bTMB效能的影响，发现肿瘤负荷大于0.1%等位基因频率的样本，组织和血浆TMB有较高的相关性。因肿瘤负荷与分期相关，研究者进一步对分期样本进行了分析，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期的bTMB PPA为0、11%、35%、54%，在Ⅳ期患者样本中，组织与血浆TMB相关性最强。在Ⅳ期、cfDNA>20 ng、tTMB界值为16 mut/Mb时，血浆高TMB患者的PPV和PPA分别为100%和63%。

研究者对设计的panel进行分析发现，与1.1 Mb的bTMB panel相比，至少约577 kb的panel有相似的检测性能和临床相关性。该研究设计的bTMB panel有较高的成本效益和检测精度，有望成为筛选接受免疫疗法的肺癌患者的预测标志物。

(编译 萧萧)